Микологическое исследование, комплекс методов, применяемых в научно-исследовательских и диагностических лабораториях для выяснения роли грибов в этиологии болезней животных.
Микологическое исследование при диагностике микозов включает микроскопию патологического материала для обнаружения возбудителя в органах и тканях больного животного, выделение чистой культуры и её идентификацию. В неясных случаях проверяют патогенность выделенных культур биологической пробой. Дополнительно используют серологический, аллергический, люминесцентный методы диагностики.
Отбор патологического материала при дерматомикозах производят с периферии свежих, поражённых очагов (корочки и волосы); при эпизоотическом лимфангите, споротрихозе, актиномикозе стерильно извлекают гной из невскрывшихся абсцессов; при кандидамикозе, аспергиллёзе и других висцеральных микозах берут соскобы с наложений на слизистых оболочках, а также кусочки поражённых внутренних органов. Патологический материал помещают в стерильные чашки Петри. Для лучшего выявления элементов грибов из патологического материала готовят препараты на предметном стекле в капле 10-20% ного раствора едкого натра с добавлением 50% ного водного раствора глицерина. Микроскопируют неокрашенные препараты (реже окрашенные по Граму) при малом увеличении, затем при X 400 или X 600. Первичную культуру возбудителей получают посевом патологического материала на агар Сабуро, МПА с глюкозой, кровяной, печёночный, сусло-агар (10-12 пробирок). При значительном загрязнении посторонней микрофлорой можно применить предпосевную обработку патологического материала или добавить антибиотики в питательную среду. Оптимальный pH питательных сред для патогенных грибов составляет 6,0-7,2, температура культивирования 26-30°C, для отдельных представителей 37°C. Посевы выдерживают до 30 сут, так как первичные культуры чаще развиваются медленно. Детальное изучение культурально-морфологических признаков, ферментативной активности и определение вида гриба проводят главным образом на специальных средах. Патогенность культур проверяют заражением белых мышей, морских свинок, кроликов, хомяков через скарифицированную кожу, подкожно, интраперитониально, внутривенно, ингаляционным методом. Серологические реакции (РСК, преципитации, агглютинации), аллергические внутрикожные пробы применяют в комплексе с другими методами при диагностике преимущественно кандидамикоза, гистоплазмоза, эпизоотического лимфангита. Люминесцентным методом выявляют у животных микроспорию.
Для микологического исследования при диагностике микотоксикозов берут средние пробы из партий кормов, вызвавших алиментарное отравление животных. Предварительно исключают инфекционные болезни, отравления ядовитыми растениями и ядохимикатами.Микологическое исследование состоит из органолептических, микроскопических анализов корма, выявления микофлоры и идентификации выделенных культур грибов. Используют биологические и физико-химические методы исследования кормов и культур грибов на токсичность.
При органолептическом анализе учитывают влажность, цвет, запах, налёты спороношений грибов (нередко корма, поражённые токсичными грибами, не отличаются по внешнему виду от доброкачественных). Для выявления поверхностной микофлоры зерно высевают в чашки Петри на агар Чапека. Глубинное поражение зерна грибами определяют после предварительной обработки его раствором сулемы 1 : 1000, 3% ным раствором формальдегида с последующей промывкой стерильной водой (для нейтрализации раствора формальдегида добавляют каплю 5% ного раствора аммиака). Затем зерно (10-15 штук) раскладывают на агар Чапека в чашки Петри. При выделении грибов из муки, отрубей, комбикорма пользуются главным образом методом разливки. Взвесь корма (10 г на 100 мл стерильной воды) встряхивают в шутгель-аппарате и по 1 мл взвеси дальнейшего разведения (1 : 1000-10 000) распределяют по поверхности агара Чапека на 8-10 чашек Петри. Грубые корма (сено, солома) высевают в чашки Петри на фильтровальную бумагу, увлажнённую стерильным раствором Ван Итерсона. Посевы кормов выдерживают 7-10 сут при t 22,26°C. На 3-5 е сут ориентировочно определяют микофлору просмотром колоний грибов на месте роста и микроскопией в капле стерильной воды или физиологического раствора. По частоте обнаружения колоний отдельных видов грибов можно приближённо судить о степени поражённости корма. При посеве методом разливки нагрузку диаспор на 1 г корма учитывают более точно. Из колоний делают отсевы на агар Чапека в пробирки для получения чистых культур грибов и определения их вида. Выделение токсичных вариантов грибов из исследуемых образцов корма - решающий момент в диагностике микотоксикозов. Токсичность образцов корма и культур грибов определяют кожной реакцией на кролике и скармливанием лабораторным животным. Для выявления в кормах и культурах грибов афлатоксинов и зеараленона (F2) применяют метод тонкослойной хроматографии на силикагеле в сочетании с люминесцентным анализом.