Реакция связывания комплемента

Реакция связывания комплемента, РСК, реакция Борде-Жангу [по имени бельг. бактериологов Ж. Борде (J. Bordet) и О. Жангу (О. Gengou), 1901], высокоспецифичная и очень чувствительная серологическая реакция, основанная на свойстве комплекса антиген-антитело фиксировать свободный комплемент (алексин), применяемая при диагностике многих бактериальных и вирусных и некоторых протозойных и гельминтозных болезней, а также для изучения процессов, сопровождающихся изменением количества антигена или антител. РСК протекает в 2 фазы: 1) взаимодействие антител, антигена и комплемента, в результате которого свободный комплемент связывается образовавшимся комплексом антиген-антитело (специфическая фаза); 2) индикация реакции сенсибилизированной эритроцитами (неспецифическая фаза). В РСК используют 2 системы: специфическую бактериологическую, состоящую из антитела (испытуемой сыворотки), антигена и комплемента, а также неспецифическую «индикаторную», содержащую гемолизин (гемолитическая сыворотка) и взвесь эритроцитов барана. Антиген соединяется с антителом только в присутствии комплемента. Если испытуемая сыворотка содержит антитела, гомологичные взятому антигену, то присутствующий в реагирующей смеси комплемент адсорбируется образующимся комплексом антиген - антитело и теряет способность лизировать сенсибилизированные эритроциты, то есть без комплемента гемолизин (гемолитическое антитело) не разрушает эритроциты (реакция положительная). В тех случаях, когда между антигеном и антителами испытуемой сыворотки нет специфического родства, комплекс не образуется и комплемент остаётся в свободном состоянии. При добавлении гемолитической системы в этом случае несвязанный комплемент вызывает гемолиз сенсибилизированных эритроцитов (реакция отрицательная). Существуют различные варианты постановки РСК: классический метод постановки в виде макро- и микровариантов, реакция длительного связывания комплемента (РДСК) на холоде, метод количеств. РСК по 50% ному гемолизу сенсибилизированных эритроцитов и др. В ветеринарной диагностической практике чаще применяют классический метод РСК в виде макроварианта, при котором берут каждого компонента по 0,5 или 0,25 мл в определённом рабочем титре. Комплемент титруют в бактериологической системе на сыворотках того же вида животных, кровь которых подлежит исследованию. Испытуемые сыворотки обычно исследуют в разведении 1 : 5 и 1 : 10 с антигеном и 1 : 5 без антигена (контроль). Время связывания комплемента в специфической фазе 20 мин, время реакции гемолиза в неспецифической фазе 20 мин при t 37-38°C. Для диагностики ряда заболеваний применяют более чувствительный метод - РДСК. При этом первую фазу реакции проводят при t 4-6°C в течение 16-18 ч, что ведёт к усилению адсорбции комплемента малыми количествами антигена и антител. Затем добавляют гемолитическую систему и реакция протекает при t 37-38°C в течение 20 мин. Результаты РСК и РДСК учитывают по степени задержки гемолиза, которую обозначают крестами или минусом, соответствующими следующим процентам гемолиза эритроцитов: ++++ от 0 до 10%; +++ от 10 до 40%; ++ от 40 до 70%; + от 70 до 90%; - от 90 до 100%. Ветеринарным законодательством предусмотрены специальные наставления по постановке, учёту и оценке РСК и РДСК для каждой болезни отдельно.