Безопасные методы отбора проб крови у свиней. Постановка правильного диагноза - одна из важнейших составляющих в мероприятиях по профилактике и борьбе с заболеваниями животных.
Попадая в организм хозяина, возбудитель независимо от патогенности запускает механизмы гуморальной (продукции антител) и клеточной защиты. Образующиеся специфические антитела попадают главным образом в кровь, и там их можно определить с помощью серологических реакций в течение периодов разной продолжительности, при некоторых инфекциях - в течение всей жизни животного.
Исследование сыворотки с соответствующим лабо-раторным диагностическим антигеном дает реакцию при условии, что сыворотка содержит специфические антитела. Определение антител к данному возбудителю доказывает лишь наличие контакта исследуемого объекта с этим агентом и ничего не говорит о том, когда этот контакт имел место (неделю, год или много лет назад) и каков был его характер - перенесение заболевания, инфекция без клинических проявлений или, наконец, вакцинация. Таким образом, серологическое обследование больного субъекта даже в случае определения высоких титров антител к определенному возбудителю не всегда позволяет утверждать, что именно этот возбудитель является причиной наблюдаемого заболевания. Оно может быть вызвано совершенно другим микроорганизмом или паразитом, а присутствие антител в сыворотке служит доказательством перенесенного в прошлом заражения, например бессимптомного, что может в некоторых случаях обусловливать невосприимчивость как раз к этому же заболеванию.
В большинстве случаев диагностическая ценность серологических реакций зависит от уверенности в том, что обнаруженные антитела появились в ответ на текущее заражение или при правильно выполненной программы вакцинации.
В хозяйстве, с учетом анамнеза, клинических и патологоанатомических данных можно установить предварительный диагноз заболевания, но окончательный диагноз заболевания устанавливается в основном при наличии данных лабораторных исследований. Для получения более достоверного диагноза желательно исследовать парные пробы сывороток крови, что позволит выявить нарастание титра антител и свидетельствовать о свежем заражении животного. Первый раз кровь берут как можно раньше после обнаружения заболевания (желательно - в течение первых 4-5 дней после появления первых симптомов или возникновения первых подозрений), второй раз - спустя 14 дней. Диагностическая лаборатория сохраняет присланные первые образцы сыворотки крови, взятой в острой фазе болезни, в замороженном состоянии до получения второй сыворотки, взятой в период реконвалесценции, и только тогда может быть поставлена серологическая реакция, так называемое исследование парных сывороток (каждая пара должна быть взята от одного животного).
Положительным результатом реакции, указывающим на течение острого процесса заражения данным возбудителем, является четырехкратное увеличение титра антител за период между первым и вторым взятием проб крови на исследование. Применение в реакции постоянной дозы сыворотки и изменяющегося количества возбудителя должно дать рост индекса нейтрализации не менее 1,7-2,0 lg, что соответствует 50-100-кратному возрастанию титра.
Если первая проба взята слишком поздно, то титр антител может достигнуть такого уровня, что второе исследование не выявит четырехкратного возрастания титра. Если же взять вторую пробу слишком рано (интервал между пробами должен быть не менее 10 дней), титр антител не успевает достигнуть максимального уровня, и разница вновь окажется слишком незначительной. Это говорит о том, что вовремя и правильно отобранные пробы крови от животных - залог правильного диагноза заболевания.
Отбор крови из яремной вены у мелкого и крупного рогатого скота не представляет затруднений для ветеринарных специалистов. Поэтому мы хотим обратить внимание на методы отбора крови у свиней, общие правила, их недостатки и преимущества.
При отборе крови необходимо руководствоваться принципом «не навреди себе, животному, окружающей среде» и обеспечить лабораторию качественным материалом для постановки достоверного диагноза. Работа должна выполняться согласно правилам гуманного обращения с животными в соответствии с руководством по здоровью и защите животных.
У свиней кровь отбирают из сосудов ушной раковины; кончика хвоста; глазного синуса; передней полой вены.
Для этого:
1) Свинья должна быть надежно зафиксирована за верхнюю челюсть с помощью веревочной петли или петли из гибкого тонкого тросика, что обеспечит безопасность берущего кровь и предохранит от травмы свинью (рис. 1);
2) Вся посуда и инструменты должны быть стерильными;
Рис. 1. Фиксация свиньи
1) Врач должен владеть методами отбора крови и исключать контакт с кровью во время взятия и приготовления сыворотки;
2) Нельзя допускать попадания крови на пол, на персонал и тело свиньи с целью предупреждения распространения возможной инфекции;
3) Во избежание нежелательной контаминации крови микрофлорой кожу на месте взятия крови необходимо очистить от грязи и продезинфицировать 70% спиртом или 5% настойкой йода;
4) Остановить вытекание крови прижиганием раны порошком сухого марганцовокислого калия или наложением лигатуры, которую потом необходимо снять;
5) Получить качественную сыворотку крови, пригодную для исследования и получения достоверного результата.
Кровь отбирают в стерильные пробирки, шприцы или специальные одноразовые шприцы типа «Моновет». Для лучшего отстаивания сывороток стенки традиционно используемых пробирок и шприцов до взятия крови необходимо увлажнить стерильным физраствором.
«Моновет» - это готовая к употреблению закрытая система взятия крови, состоящая из шприца-пробирки и иглы. В игле и шприце-пробирке устроены клапаны, предотвращающие вытекание крови при отсоединении иглы от шприца-пробирки, что снижает риск инфицирования окружения. В самом шприце-пробирке находятся пластиковые шарики с нанесенным активатором свертывания крови (или наоборот, в зависимости от модели и цели взятия крови), благодаря чему кровь быстро свертывается и образуется четкая граница между сгустком и сывороткой. Устройство можно применять для вакуумного или шпри- цевого метода отбора крови. При отборе в шприц-пробир- ку набирается постоянное количество крови, что позволяет центрифугировать кровь в «Моновете» без уравновешивания. Также система «Моновет» является прекрасным транспортным контейнером.
Для взятия крови из ушной вены сначала подготавливают поверхность кожи уха. Для этого удаляют грязь, выстригают щетину и дезинфицируют место прокола. Вокруг уха накладывают резиновый жгут, который необходимо снять после завершения процедуры взятия крови. Для взятия крови иглу № 16 вводят в вену, отбирают кровь в шприц и переливают в стерильную пробирку (рис. 2). Отбор крови в пробирку методом разрезания уха применяться не должен.
Рис. 2. Взятие крови из ушной вены
Для взятия крови из сосудов хвоста кончик хвоста обмывается и дезинфицируется 70% раствором спирта или 5% раствором йода. Кончик хвоста отсекают скальпелем (рис. 3) и берут необходимое количество крови в пробирку. После окончания процедуры на хвост накладывают лигатуру, прижигают 5% раствором йода или сухим порошком марганцовокислого калия. Через 1-2 часа необходимо удалить лигатуру с хвоста для предупреждения возможного некроза тканей.
Рис. 3. Взятие крови из сосудов хвоста
Образцы крови могут быть получены из глазного синуса свиней (рис. 4). Взрослых свиней надежно фик-сируют стоя, а поросят-сосунов удерживают одной рукой в горизонтальном положении. Кончик иглы, соединенной со шприцом, вводят непосредственно в ткани мигательной перепонки. При введении Иглу необходимо направлять вниз с небольшим нажимом, наклоняя внутрь. Иглу продвигают вперед на 2-4см, пока она не попадет в венозный синус, который примыкает к костной глазной впадине (схема 3). Срез иглы должен быть направленным в сторону кости. При прокалывании тканей синуса кровь начнет вытекать из иглы. При необходимости повторное взятие крови рекомендуется проводить через 10-12 дней.
Рис. 4. Взятие крови из глазного синуса
Отбор крови возможен и из передней полой вены.
У больших свиней кровь берут в положении стоя. Для этого иглу длиной 6 см направляют справа или слева от киле- видного хряща грудины на линии, проведенной от месторасположения хряща к основанию уха. Иглу направляют внутрь, вверх и обратно (схема 1).
Схема 1. Взятие крови из передней полой вены у больших свиней, зафиксированных в положении стоя
Для отбора крови в положении свиньи на спине (схема 2) иглу 20-го размера длиной 3,8 см направляют внутрь, вниз и обратно до тех пор, пока она не попадет в вену внутри дугообразного образования между двумя первыми ребрами.
Схема 2. Взятие крови из передней полой вены у крупных свиней, зафиксированных в положении на спине (А - анатомия вентрального шейного отдела свиньи; 1 -грудина; 2 - внешняя яремная вена; 3 -лицевая вена; 4 - челюстной край; 5 - верхнечелюстная вена; В -место введения иглы шприца для взятия крови).
Схема 3. Взятие крови из глазного синуса свиней
(1 - боковой угол глазной щели - нижнее веко; 2 - средний угол глазной щели - нижнее веко; 3 - игла для взятия крови после введения ее в глазничный венозный синус; 4 - третье веко и его лимфатический узел (окружающий хрящ); 5 - глазничный венозный синус; 6 - глубоко расположенный лимфатический узел третьего века; 7 - срединная костная стенка глазного синуса; 8 - зрительный нерв; 9 - обонятельная луковица; 10 -решетчатая кость и носовые раковины; 11 - дополнительная точка для взятия крови).
Автор: Вабишевич Ф.С., Дудников Л.A., НПП «Био-Тест-Лаборатория»